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PCR實驗室污染核酸假陽性問題如何處理?
發布時間:2021-03-30 點擊次數:25次
為避免結果假陰性、假陽性以及出現誤差,需要實驗室人員及時發現實驗室存在的不足并加以改正,這樣才能為臨床的進一步治療提供最準的數據。
產生污染主要有以下4個原因:
①是PCR擴增產物的污染。這也是最-常見的污染原因。PCR產物經反復多次的擴增,其復制量遠遠超過PCR的檢測極限,所以即使是極微量的污染也足以造成實驗結果假陽性。
②試劑的污染。在試劑的配制過程中,接觸了污染的容器、移液器、槍頭、溶液等物導致試劑被污染。
③待測樣品被污染。放置樣品的容器被污染或由于容器密封不嚴導致樣品與外界接觸被污染;其次在核酸提取過程中使用了被污染的移液器或槍頭導致樣品被污染;另外,某些樣品中含有-病毒,若彌散到空氣中則有可能形成交叉污染。
④氣溶膠污染。若氣溶膠中包含病毒等污染物擴散至空氣中極有可能造成PCR產物污染。氣溶膠是由空氣與液體表面摩擦而產生的,開蓋、晃動反應管及污染加樣器的反復吸樣都可形成氣溶膠從而導致交叉污染。據計算一個氣溶膠顆??珊?8 000 拷貝,因此,應尤其重視由氣溶膠導致污染的問題。PCR 實驗室只要出現了污染,之前的結果報告就變為無效而且也無法進行其他的實驗操作。必須找出并徹底清除污染源,才能得到準確有效的實驗結果。
為了提高實驗室的檢測質量,避免實驗室污染以及確保實驗室的生物安全,規范有效的管理是實現這一切的根本措施。但有時會出現管理不到位甚至是疏忽的地方,比如隨意出入實驗室,甚至逆行;沒有按照規范穿戴口-罩、鞋套;試驗期間緩沖間兩側門同時打開;實驗完畢后忘記開紫外燈消毒等。這些不規范的行為為實驗室的安全和污染埋下了隱患,從而影響檢驗結果的準確性。因此,有效的管理和實驗室操作規程的規范執行尤為重要。
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